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                活性氧检测试剂盒(红色荧光)

                更新:2022-10-25 17:33:39

                中文名:活性氧检测试剂盒(红色荧光)说明书下载暂无
                英文名:Reactive Oxygen Species Assay Kit
                描述:活性氧检测试剂盒(Reactive Oxygen Species Assay Kit)利用荧光探针 DHE 进行活性氧检测。DHE 可自由透过活细胞膜进入细胞内,在细★胞质中呈蓝色荧光,被细胞内的 ROS 氧化后形成氧化乙啶掺入染色体 DNA 中,使细胞核呈现明亮的红色荧光。在激发波长 535nm,发射波长 610nm 附近,使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、 荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测荧光强度,测定细胞内活性氧水平。具有背景低、灵敏度高、线性范围宽、使用方便等优点,是一种快速简便的组织或培养活细胞中 ROS 经典检测方法。
                订购信息
                  货号规格价格品牌
                  G2706-10.2ml520GBCBIO
                  G2706-20.5ml960GBCBIO
                  G2706-31ml1580GBCBIO
                产品介绍
                  产品简介:
                   活性氧检测试剂盒(Reactive Oxygen Species Assay Kit)利用荧光探针 DHE 进行活性氧检测。DHE 可自由透过活细胞膜进入细胞内,在细胞质中呈蓝色荧光,被细胞内的 ROS 氧化后形成氧化乙啶掺入染色体 DNA 中,使细胞核呈现明亮的红色荧光。在激发波长 535nm,发射波长 610nm 附近,使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、 荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测荧光强度,测定细胞内活性氧水平。具有背景低、灵敏度高、线性范围宽、使用方便等优点,是一种快速简便的组织或培养活细胞中 ROS 经典检测方法。
                  产品特点:
                  适用范围:贴壁细胞、悬浮细胞、新鲜动物组织
                  工作波长:最佳激发波长 480-535nm,最佳发射波长 590-610nm
                  所需设备:流式细胞仪、荧光酶标仪、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计等
                  储存和稳定性:
                  -20℃避光冻存。本试剂盒自订购之日起一年内有效。
                  试剂盒组成:
                  货号 G2706-1 G2706-2 G2706-3
                  DHE Solution(5mM) 0.2ml 0.5ml 1ml
                  说明书 1份 1份 1份
                  注意事项:
                  开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集于管底,避免开盖时染液损失。
                  要设有无DHE孵育的对照,即不加探针,只用0.01M PBS重悬的细胞。
                  荧光探针标记后,一定要洗净残余的未进入细胞内的探针,以避免背景升高。多次清洗时注意操作规范,避免将细胞洗掉。
                  对于药物处理(孵育)时间较短的细胞(2小时以内、也有建议 4小时以内),可以先用荧光染料进行标记,后用药物刺激细胞后。对于药物处理时间较长的细胞(超过 4 小时或 6 小时以上),建议先用药物处理(刺激)细胞,后用探针标记。
                  DHE 在光照和空气中易被氧化,保存和操作中应注意避光。
                  对不同的细胞和组织,应选择合适的孵育时间和浓度,以观察ROS的变化。
                  为了▂您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作

                  使用说明:

                  一、细胞样本:

                  A:收集细胞,进行↑活性氧测定

                  1        细胞收集:

                  悬浮细胞:2000rpm,离心5min,收集沉淀,用 0.01M PBS 或无血清培养液洗涤2次,1000rpm,离心5min,弃上清,取细胞沉淀;

                  贴壁细胞:吸去培养液,用0.01M PBS 或无血清培养液反复吹々打,使细胞层全部进入PBS 或培养液中,收集细胞悬液,用0.01M PBS 或无血清培养液洗涤2次,1000rpm,离心5min,弃上清,取细胞沉淀;

                  2        加入DHE探针:用稀释好的 DHE荧光探针重悬细胞沉淀,一般情况下,细胞密度要求1*106-2*107/ml,推荐探针初始工作浓度为10 μM(DHE 工作浓度可在 1μM~100 μM 范围内,需进行预实验确定最适浓度)。

                  3        37 ℃孵育细胞10-90分钟。通常情况下,10-30分钟即可。

                  注意:孵育时间长短与细ξ胞类型、刺激条件、DHE 浓度等有关。可以每隔5min颠倒混匀一下,使探针与样本充分接触。

                  4        1000g,离心5min,去上清收集细胞沉淀,用 PBS 缓冲液洗涤 2 次,重悬细胞。

                  5        进行荧光╲检测,以荧光度数值表示结果↘

                  B:不收集细胞,直接将探针加入培养基测定

                  1.       加入DHE探针:去除细胞培养基上清「,加入用无血清培养液稀释好的 DHE 探针(推荐探针终浓度为 10 μM),加入探针的体积以能盖住细胞为宜,通常 6 孔板单孔不少于 500 μl。

                  2.       37℃孵育细胞10-90分钟。通常情况下,10-30 分钟即可。

                  注意:孵育时间长短与细胞类型、刺激条件、DHE 浓度等有关。可以每隔 5min 颠倒混匀一下,使探针与样本充分接触。

                  3.       弃去上层培养液,用无血清培养液或0.01M PBS反复吹打,使细胞层全部进入PBS或培养液中。

                  4.       收集细胞悬液,用 0.01M PBS 或无血清培养液洗涤 2 次,去除未进入细胞内的探针,1000rpm,离心5min,弃上清,收集细胞沉淀,用PBS缓冲液洗涤2次,重悬细胞。

                  5.       进行荧光检测,以荧光度数值表示结果。

                  二、动物组织样本

                  1.       细胞悬液制备:可采用单细胞悬液制备仪或传统的组织处理方法如:酶解法、研磨法等制备单细胞悬液;

                  2.       加入DHE探针:去除细胞培养基上清,加入用无血清培养液稀释好的 DHE探针(推荐探针终浓度为 10 μM)。

                  3.       37℃孵育细胞10-90分钟。通常情况下,10-30分钟即可。

                  注意:孵育时间长短与细胞类型、刺激条件、DHE 浓度等有关。可以每隔 5min 颠倒混匀一下,使探针与样本充分接触。1000g,离心5min,去上清收集细胞沉淀,用PBS缓冲液洗涤2次,重悬细胞。

                  4.       进行荧光检测,以荧光度数值表示结果。

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